藏药兔耳草常用基原的ITS2序列鉴定研究

摘要：

目的 利用DNA条形码内转录间隔区2(internal transcribed spacer2,ITS2)序列针对自采及流通使用环节的不同基原兔耳草进行分析,建立一种快速鉴定常用兔耳草的方法,并分析市场流通的主流品种.方法 采用试剂盒提取101份兔耳草样品的DNA,针对其ITS2片段进行PCR扩增并双向测序,获取ITS2序列信息;并从GenBank上下载相关序列28条.运用MEGA6.0对129条ITS2序列进行比对分析,计算种内和种间K2P遗传距离,构建邻接法(neighborjoining,NJ)系统进化树,并预测ITS2二级结构.采用BLAST法及NJ聚类分析法分析市场流通兔耳草基原.结果 除四川部分区域所产全缘兔耳草Lagotis integra与革叶兔耳草L.alutacea种间亲缘关系近外,短筒兔耳草L.brevituba、全缘兔耳草、圆穗兔耳草L.ramalana、革叶兔耳草、短穗兔耳草L.brachystachya及紫叶兔耳草L.praecox的种内最大遗传距离均小于种间最小遗传距离,具有明显的条形码间距.系统进化树显示短筒兔耳草、圆穗兔耳草、短穗兔耳草及紫叶兔耳草单独聚为一支,四川部分区域所产全缘兔耳草与革叶兔耳草聚为一支,其余全缘兔耳草聚为一支.通过ITS2二级结构发现,各基原兔耳草在茎环数目、大小及位置均有一定差异,可区分亲缘关系近的全缘兔耳草与革叶兔耳草.市场分析显示,市面上流通的兔耳草有6种基原,以全缘兔耳草使用占比最高,短筒兔耳草次之,短穗兔耳草及圆穗兔耳草较低,紫叶兔耳草及革叶兔耳草最低.结论 ITS2序列可以作为DNA条形码用来鉴别常用藏药兔耳草的基原,市场主流兔耳草品种为全缘兔耳草、短筒兔耳草及短穗兔耳草.

关键词：兔耳草、ITS2序列、短筒兔耳草、全缘兔耳草、圆穗兔耳草、革叶兔耳草、短穗兔耳草、紫叶兔耳草、主流品种

所属期刊栏目：53

分类号：R286.12(中药学)

资助基金：国家食药监总局药化司专项;四川省药品监督管理局科技计划项目;国家自然科学基金;四川省科技厅应用基础计划课题;四川省中医药管理局项目;四川省民族药标准提升项目

在线出版日期：2023-02-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：6857-6864