温郁金中茉莉酸氨基酸合酶关键基因JAR的克隆及生物信息学分析

摘要：

目的 克隆温郁金茉莉酸氨基酸合酶关键基因JAR(JA-amino acid synthetase)的全长cDNA序列,并进行生物信息学和表达分析.方法 根据温郁金转录组数据设计特异性引物.以温郁金根茎的cDNA为模板,通过RT-PCR扩增获得JAR全长cDNA序列,利用生物信息学软件预测基因编码蛋白的特征;利用ClustalW和MEGA6.06软件构建温郁金JAR的系统进化树;构建原核表达载体PET-22B(+)-JAR,纯化重组蛋白JAR5,并进行鉴定.结果 扩增后的基因编码582个氨基酸,全长1749bp,且具有典型的GH3特征结构域,不具跨膜域,不存在信号肽,属于不稳定蛋白;PCR扩增后得到约1 800 bp大小的片段,经凝胶过滤色谱纯化,最终得到基于蛋白印迹实验(Western blotting)验证正确的66 200大小的重组蛋白.结论 首次克隆并分析了温郁金JAR基因,纯化了JAR5蛋白,为进一步研究温郁金JAR基因蛋白功能研究提供依据.

关键词：温郁金、JAR基因、基因克隆、JAR5、蛋白纯化

所属期刊栏目：53

分类号：R286.12(中药学)

资助基金：大理药业股份有限公司横向课题;温莪术规范化生产及基地建设研究

在线出版日期：2022-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1838-1843