葛根素通过circ-TLK1/miR-367-3p/TLR4抑制SK-N-SH细胞氧糖剥夺损伤

摘要：

目的 探讨葛根素对缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)神经细胞损伤的保护作用及机制.方法 建立氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)诱导的人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH损伤模型,以葛根素进行干预,采用qRT-PCR法检测细胞circ-丝氨酸/苏氨酸蛋白扰动样激酶l(tousled-like kinase1,TLK1)和miR-367-3p mRNA表达情况;采用MTT法检测细胞存活率;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-a,TNF-a)水平;采用Western blotting检测细胞Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)蛋白表达情况.采用生物信息学在线软件预测miR-367-3p与circ-TLK1、TLR4之间的靶向关系;采用双荧光素酶标记实验和RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)实验验证靶向结合关系.结果 与模型组比较,葛根素能够明显提高OGD诱导的SK-N-SH细胞存活率(P＜0.05、0.01、0.001),显著降低细胞凋亡率(P＜0.01、0.001),显著降低IL-6和TNF-α水平(P＜0.01、0.001).模型组circ-TLK1 mRNA表达水平显著升高(P＜0.001),葛根素抑制circ-TLK1 mRNA表达水平(P＜0.001),过表达circ-TLK1能够逆转葛根素对OGD诱导的SK-N-SH细胞损伤保护作用(P＜0.01、0.001).circ-TLK能够靶向负调控miR-367-3p表达,模型组miR-367-3p mRNA表达水平显著降低(P＜0.001),葛根素显著上调miR-367-3p mRNA表达水平,抑制miR-367-3p能够逆转葛根素对OGD诱导的SK-N-SH细胞损伤保护作用(P＜0.05、0.001).miR-367-3p能够靶向负调控TLR4蛋白表达,模型组TLR4蛋白表达水平显著升高(P＜0.001),葛根素显著下调TLR4蛋白表达水平(P＜0.001),过表达TLR4能够逆转葛根素对OGD诱导的SK-N-SH细胞损伤保护作用(P＜0.05、0.001).circ-TLK1能够通过结合miR-367-3p调控TLR4表达.结论 葛根素能够通过作用于circ-TLK1/miR-367-3p/TLR4对IS神经细胞损伤起到保护作用.

关键词：葛根素、cir-TLK1、miR-367-3p、TLR4、缺血性脑卒中、氧糖剥夺

所属期刊栏目：52

分类号：R285.5(中药学)

资助基金：河南省中医药科学研究专项课题2018ZY3052

在线出版日期：2021-08-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：3286-3295