地黄毛蕊花糖苷合酶基因的克隆、亚细胞定位与表达特性分析

摘要：

目的 克隆地黄Rehmannia glutinosa毛蕊花糖苷合酶基因(RgAcS1),分析其亚细胞定位和表达模式.方法 在地黄的转录组数据库中通过注释和比对,获得地黄RgAcS1的cDNA序列,利用聚合酶链式反应(PCR)方法进行分子克隆.构建绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体,以农杆菌瞬时表达法观测RgAcS1的亚细胞定位.利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测RgAcS1基因在地黄块根不同部位的表达模式.结果 获得地黄1个莽草酸-O-羟基肉桂酰基转移酶的全长编码序列,cDNA长度为1 659 bp,包含1个1 296bp的开放阅读框,编码431个氨基酸残基,蛋白质相对分子质量为475 900,具有莽草酸-O-羟基肉桂酰基转移酶的典型结构域,命名为RgAcS1.亚细胞定位结果显示RgAcS1主要分布在细胞质中,在细胞核中也有分布.qRT-PCR分析表明,RgAcS1在地黄的周皮和根毛中表达量较高,在木质部和韧皮部表达量较低.RgAcS1基因在地黄品种北京1号、QH1和85-5中非菊花心中表达量均高于菊花心中的表达量,且差异达极显著水平.结论 获得地黄RgAcS1的cDNA序列,明确了RgAcS1的亚细胞定位和时空表达模式,为进一步研究RgAcS1基因在毛蕊花糖苷合成过程中的作用奠定基础.

关键词：地黄、毛蕊花糖苷合酶、序列分析、亚细胞定位、qRT-PCR

所属期刊栏目：51

分类号：R285.5(中药学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目;国家自然科学基金资助项目;国家重点研发计划项目

在线出版日期：2020-10-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：4739-4746