栽培远志qRT-PCR内参基因筛选与P450s基因的时空表达分析

摘要：

目的 筛选适用于不同生长年限和不同部位的栽培远志实时荧光定量PCR分析(quantitative real time PCR,qRT-PCR)的稳定内参基因,为远志体内各个基因表达分析提供合适内参基因.并对4个细胞色素P450单加氧酶(cytochrome P450 monooxygenase,P450s)基因在上述远志样品中的差异表达进行分析,明确4个P450s基因在栽培远志中的时空表达分布.方法 通过qRT-PCR获取Tubulinl、Tubulin 2、Elongation l、Elongation2、Actin1、Actin 2、GAPDH和cdc-42 8个候选内参基因在上述远志样品中的熔解曲线与Ct值;利用软件geNorm和NormFinder对候选内参基因的表达稳定性进行评价;通过qRT-PCR分析4个P450s基因CYP709B2、CYP71AP39、CYP88A85、CYP714E38在上述远志样品中的相对表达情况.结果 geNorm分析结果表明,在远志(1～3年生)根、茎、叶、花中稳定表达的为Tubulin2与Elongation1;NormFinder结果显示,Elongation1是最稳定的内参.CYP709B2、CYP71AP39基因在远志茎、叶(1～3年生)中的mRNA表达量最高,在根与花中的表达量则较少.而CYP88A85、CYP714E38基因则在远志根(1～3年生)中的mRNA表达水平较高.结论 Elongation 1适合作为栽培远志体内基因表达分析的内参基因.栽培远志中的P450s基因在远志根、茎、叶、花中的表达趋势不一致.

关键词：远志、实时荧光定量PCR、内参基因、细胞色素P450单加氧酶、时空表达

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分类号：R286.12(中药学)

资助基金：山西省重点研究开发计划;国家中药标准化项目;地产中药功效物质研究;利用山西省重点实验室项目;山西省科技创新重点团队;山西省中药现代化振东专项-远志品种选育及配套适应性高产栽培技术研究

在线出版日期：2020-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：6084-6090