铁皮石斛DoSRK2E基因的克隆与表达分析

摘要：

目的 克隆铁皮石斛蔗糖非酵解1型相关蛋白激酶2(SnRK2)家族基因,并进行生物信息学和表达分析.方法 通过RT-PCR、RACE克隆铁皮石斛SnRK2 (DoSRK2E)基因cDNA全长,利用生物信息学软件预测基因编码蛋白的相对分子质量、等电点、结构域、跨膜结构、信号肽及亚细胞定位等;利用DNASTAR和MEGA进行多序列比对和系统发育关系重建分析;利用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)技术检测基因组织表达模式.结果 获得铁皮石斛DoSRK2E基因(GenBank登录号API65110),cDNA全长1 795 bp,包含1个1 086 bp的完整开放阅读框,编码蛋白相对分子质量40 850,等电点4.80,无信号肽和跨膜域,包含1个蛋白激酶结构域、1个ATP结合位点和1个Ser/Thr蛋白激酶活化位点,预测定位在内质网膜上;DoSRK2E蛋白与植物SnRK2蛋白序列高度一致,系统发育位置位于SnRK2亚家族的分支Ⅲ,与拟南芥AtSnRK2.6的亲缘关系最近;DoSRK2E基因在铁皮石斛根中表达量最高,茎中次之,叶中最低.结论 首次从珍稀濒危药用植物铁皮石斛中克隆得到SnRK2家族基因DoSRK2E,对其分子特性与组织表达模式进行了分析研究,为进一步揭示该基因在铁皮石斛逆境胁迫中的作用机制提供基础.

关键词：铁皮石斛、蛋白激酶、克隆、表达、生物信息学分析

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分类号：R282.12(中药学)

资助基金：陕西省教育厅科学研究计划项目18JK0221;陕西中医药大学2017年博士科研启动经费104080001;陕西省高校青年杰出人才支持计划项目;咸阳市中青年科技领军人才项目

在线出版日期：2019-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：4960-4966