知母须根总皂苷提取工艺的优化及其对糖氧剥夺损伤的PC12细胞保护作用研究

摘要：

目的 优化知母须根总皂苷提取工艺,探讨其对糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的PC12细胞的保护作用.方法 在单因素实验基础上,利用响应面法优化知母须根总皂苷提取工艺;建立OGD损伤的PC12细胞模型,采用终质量浓度为20、40、80 mg/L的知母须根总皂苷进行干预.分别用倒置显微镜观察细胞形态,MTT法测定细胞存活率,荧光探针二氯荧光素-双乙酸盐(DCF-DA)法测定细胞内活性氧(ROS)含量,AnnexinV/PI双染法测定细胞凋亡率,蛋白免疫印记法检测凋亡信号蛋白Bcl-2、Bax表达情况.结果 知母须根总皂苷提取的最优条件为乙醇体积分数72.22％,料液比1:11,提取时间73.33 min,在此条件下,理论提取率为8.38％,实测提取率为8.33％.PC12细胞经OGD损伤4h后细胞活力显著降低,知母须根总皂苷对其呈现保护作用,并随着知母须根总皂苷质量浓度的升高而增强;流式细胞术分析结果表明知母须根总皂苷能明显减少OGD损伤PC12细胞中ROS含量及凋亡率,免疫印迹实验结果表明知母须根总皂苷可上调PC12细胞Bcl-2表达并下调Bax表达.结论 通过响应面法优化的工艺得率高、提取效果好.知母须根总皂苷对OGD损伤的PC12细胞具有一定的保护作用,其机制可能与减少OGD诱导PC12细胞ROS含量、抑制线粒体凋亡通路有关.

关键词：知母须根、总皂苷、响应面优化、PC12细胞、OGD损伤、细胞凋亡

所属期刊栏目：49

分类号：R285.5(中药学)

资助基金：国家重点研发计划项目2017YFC1701600;2018年度安徽高校科学研究重点项目:知母须根总皂苷抑制AD转基因秀丽隐杆线虫中β淀粉样蛋白毒性作用及机制研究KJ2018A0298;安徽省高校科研创新平台团队建设项目:中药饮片产地加工与炮制一体化关键技术研究创新团队2015TD035

在线出版日期：2018-08-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：3087-3094