阳春砂转录因子AvMYC4b的克隆及原核表达

摘要：

目的 阳春砂是中药砂仁的主要来源植物,其转录组中己筛选出预测与萜类合成相关的候选转录因子unigene,对其进行克隆、序列分析和原核表达,以进一步认识阳春砂药效物质萜类合成的调控元件.方法 根据阳春砂转录组数据中预测为AvMYC4b的Unigene0074125序列设计特异引物,提取阳春砂叶片RNA并反转录成cDNA,以此为模板经PCR扩增得到AvMYC4b的核心片段,再通过RACE技术获得全长cDNA,然后进行编码区全长的GATEWAY TOPO克隆.通过LR反应构建原核表达载体,转化大肠杆菌Rosetta (DE3)细胞,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)和阿拉伯糖在16℃下培养诱导融合蛋白表达,收集菌体,经过裂解、超声、纯化,用SDS-PAGE检测蛋白表达结果.结果 克隆获得的AvMYC4b全长有2 579 bp,包含195 bp的5'UTR,1 995bp的ORF和389bp的3'UTR,编码664个氨基酸,预测蛋白相对分子质量为72 211.经过生物信息学分析,AvMYC4b氨基酸序列与其他植物的MYC相似,含有转录因子MYC家族的保守结构域,预测可定位于细胞核中.成功构建重组表达载体pDEST17-AvMYC4b并转化Rosetta (DE3)细胞,经诱导表达得到AvMYC4b融合蛋白,SDS-PAGE结果显示蛋白相对分子质量约80 000,与预测相符.结论 从阳春砂中克隆得到bHLH家族转录因子AvMYC4b,并建立了AvMYC4b原核表达系统,为该转录因子的生物功能研究奠定了基础.

关键词：阳春砂、AvMYC4b、转录因子、序列分析、原核表达

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分类号：R282.12(中药学)

资助基金：国家自然科学基金青年基金项目81303163;广东省高等学校优秀青年教师培养计划Yq2013042

在线出版日期：2018-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1390-1397