蒙古黄芪中2种具有免疫活性的可溶性粗蛋白提取工艺优选

摘要：

目的 优选蒙古黄芪Astragalus membranaceus mongholicus中2种免疫活性蛋白AmPR10-16kDa和HQGP-2的最佳提取工艺.方法 以蒙古黄芪中所含可溶性蛋白AmPR10-16kDa和HQGP-2二级结构的圆二色性对提取温度和提取溶剂种类进行考察;对该2种蛋白提取条件进行单因素考察,并采用L9(34)正交试验设计法,采用Image凝胶图形分析软件以AmPR10-16kDa和HQGP-2在SDS-PAGE凝胶图中的蛋白条带灰度值(峰面积)为指标,考察提取温度、料液比、提取时间、提取溶剂(pH值)、药材粒度、提取次数对AmPR10-16kDa和HQGP-2蛋白条带灰度值的影响,从而确定AmPR10-16kDa和HQGP-2的最佳提取工艺,辅以其免疫抑制率(CCK-8法)和可溶性蛋白定量测定(BCA法)作为佐证.结果 建立了蒙古黄芪中AmPR10-16kDa和HQGP-2的最佳提取工艺:向药材粉末(过4号筛)5.0g中加入16倍量Tris-HC1,在温度40℃条件下恒温提取60 min,以100 r/min搅拌.蒙古黄芪蛋白质提取率为65 mg/g,且质量浓度为90 μg/mL粗蛋白的免疫抑制率为90.90％.结论优化的提取工艺能正确反映AmPR10-16kDa和HQGP-2收率的最高相对量,为AmPR10-16kDa和HQGP-2的进一步研究提供了稳定、合理、可行的提取工艺.

关键词：蒙古黄芪、蛋白质、蛋白质二级结构、SDS-PAGE、正交试验、CCK-8法

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分类号：R284.2(中药学)

资助基金：国家国际合作专项项目2013DFA30700;山西省科技攻关项目20130321031-01;山西省自然科学基金资助项目2013011052-4

在线出版日期：2016-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2641-2649