采用巢式PCR-直接测序法分析人参达玛烯二醇合成酶基因单核苷酸多态性

摘要：

目的 建立人参皂苷生物合成通路中的关键酶——人参达玛烯二醇合成酶(DS)基因cDNA序列的单核苷酸多态性(SNP)检测方法,为人参属植物DS基因的SNP研究以及人参类药材的品种鉴定提供参考.方法 采集不同产地、不同品种和生长年限的人参样品,提取RNA,逆转录为cDNA.采用巢式PCR进行扩增,根据人参DS基因cDNA保守序列设计1组引物用于第1轮PCR,2组DS基因上下游分段引物用于第2轮PCR,扩增产物直接测序.测序结果经BLAST同源性比较后,采用DNAMAN软件进行多重比对分析,以发掘不同样品间DS基因差异位点作为候选SNP.结果 57份人参样本共获得1 1 1个符合测序要求的DS基因上下游分段PCR产物,其中测序成功103个,序列经BLAST判定为人参DS基因,经多重比对,发现6个样品存在7个SNP位点.结论 建立了巢式PCR-直接测序法发掘人参DS基因cDNA序列的SNP,方法具有特异性好、操作简单、结果准确等优点.可用于检测人参样品的DS基因是否含有SNP及其类型,这可为人参及其相关药材和产品的质量评价新方法研究提供有价值的遗传研究工具和分子标记资源.

关键词：人参、达玛烯二醇合成酶、单核苷酸多态性、巢式PCR、RNA、cDNA

所属期刊栏目：46

分类号：R282.12(中药学)

资助基金：澳门科学技术发展基金071/2011/A3;澳门基金会0206

在线出版日期：2015-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2127-2133