铁皮石斛丙酮酸激酶基因的克隆与表达分析

摘要：

目的 克隆珍稀濒危药用植物铁皮石斛丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)基因(DoPK),并进行生物信息学分析以及检测基因在不同器官中的表达情况.方法 采用RACE技术获得基因的全长cDNA;利用生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域及亚细胞定位等分子特性;用DNASTAR 6.0和MEGA 4.0分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析;借助r实时荧光(real-time quantitative) PCR (RT-qPCR)分析基因在不同器官中的表达情况.结果 克隆获得DoPK(GenBank注册号KC178572)的cDNA全长1 895 bp,编码一条由511个氨基酸组成的多肽,相对分子质量为55 040,等电点7.00;DoPK基因与江南卷柏、拟南芥、马铃薯和葡萄等植物的PK基因有71％、86％、89％和91％的相似性;DoPK蛋白包含保守的丙酮酸激酶结构域(21～497)和活性位点(235～247);DoPK属于胞质型的CYTOSOLIC-1亚类,与单子叶植物亲缘关系较近;DoPK基因为组成型表达,其转录本在石斛茎中的相对表达量较高,为叶中的2.29倍,根中次之,为叶中的1.28倍.结论 克隆了胞质型的铁皮石斛DoPK基因的全长cDNA序列,为进一步研究其在铁皮石斛生长发育中的作用奠定基础.

关键词：铁皮石斛、丙酮酸激酶、基因克隆、表达分析、生物信息学

所属期刊栏目：45

分类号：R282.12(中药学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31070300,31101608;陕西省科技计划青年科技新星项目2012KJXX-44

在线出版日期：2014-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：990-995