一种基于抗氧化反应元件的抗氧化药物筛选模型的制备

摘要：

目的 利用抗氧化反应元件(ARE)调控荧光素酶(Luc)报告基因的表达水平,建立抗氧化药物筛选细胞模型.方法 构建由ARE调控Luc表达的重组质粒载体pARE-Luc-Neo,使用FuGENE@HD转染剂将重组质粒转染人胚肾上皮Hek293细胞,通过G418进行筛选,使用稀释法挑选阳性单克隆细胞,经抗氧化蛋白诱导剂TBHQ诱导,检测细胞中Luc的活性,筛选Luc高活性的单克隆细胞株.利用白藜芦醇和姜黄素评价阳性克隆的筛选效果,观察5个中药单体穿心莲内酯、隐丹参酮、水飞蓟素、苦参碱和虎杖苷在不同浓度(0、3.125、6.25、12.5、25、50、100μmol/L)时对Luc表达水平的影响.结果 通过检测Luc活性,筛选获得Hek293-ARE,该细胞中的Luc的表达水平受ARE调控,且在一定范围内与诱导剂的浓度呈相关性.穿心莲内酯、隐丹参酮与水飞蓟素有较好的诱导效果.结论 建立的抗氧化药物细胞筛选模型可有效地、高通量地用于抗氧化药物的初步筛选.

关键词：抗氧化药物、药物筛选、抗氧化作用元件、细胞模型、荧光素酶报告基因

所属期刊栏目：44

分类号：R965.1(药理学)

资助基金：国家高技术研究发展计划"863"项目2011AA100603;"重大新药创制"科技重大专项2012ZX09102301

在线出版日期：2013-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2112-2117