三叶木通MSAP反应体系的优化及引物筛选

摘要：

目的 研究三叶木通表观遗传多样性,建立并优化三叶木通甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP)反应体系.方法 以三叶木通叶片为材料,利用正交试验建立三叶木通MSAP的预扩增和选择性扩增的最佳反应体系.结果 建立的MSAP最佳反应体系为酶切反应;Hpall/Mspl 10 U,EcoR I 10 U;预扩增反应;总体积20 μL,连接产物2μL,E00、HM00各125 ng,dNTPs 0.312 5 mmol/L,Mg2+ 1.875 mmol/L,Taq DNA聚合酶2U;选择性扩增反应;总体积20 μL,稀释200倍的预扩增产物5μL,引物E-ACT、HM-CAT各50 ng,dNTPs 0.250 mmol/L,Mg2+ 1.250mmol/L,Taq DNA酶1 U.利用优化的体系,最终从MSAP的80对引物中筛选出有效引物6对.结论 建立的MSAP反应体系可用于后续三叶木通DNA甲基化的相关研究.

关键词：三叶木通、MSAP、遗传多样性、体系优化、引物筛选、酶切反应

所属期刊栏目：43

分类号：R282.12(中药学)

在线出版日期：2012-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：572-576