大蒜鳞茎蒜氨酸酶基因克隆及其在毕赤酵母中的表达
目的 从大蒜鳞茎中克隆蒜氨酸酶基因,构建蒜氨酸酶真核表达载体,并在毕赤酵母系统中表达,进一步探讨重组蒜氨酸酶的生物学活性.方法 利用RT-PCR方法克隆大蒜鳞茎蒜氨酸酶基因,通过pPIczaC载体构建pPIczaC-蒜氨酸酶真核表达质粒,电转化法导入毕赤酵母X-33,筛选阳性克隆,经甲醇诱导后取表达上清进行SDS-PAGE和Western blotting分析.利用丙酮酸法检测重组蒜氨酸酶和提取的天然蒜氨酸酶的活性,Lowry法测2种蒜氨酸酶蛋白质量,通过比活力比较2种酶活性大小.结果 从大蒜内克隆出蒜氨酸酶基因,大小为1500bp,重组蒜氨酸酶相对分子质量约为5.5×104,存在于毕赤酵母表达上清液中.重组蒜氨酸酶比活力为(82.09±3.89) U/mg,天然蒜氨酸酶比活力为(176.49±5.06) U/mg.结论 蒜氨酸酶基因可以在毕赤酵母表达系统中获得表达,重组蒜氨酸酶具有酶活性,但是其活性低于提取的天然蒜氨酸酶.
蒜氨酸酶、克隆、毕赤酵母、pPlczaC载体、RT-PCR
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R282.12(中药学)
浙江省教育厅课题Y200805242;浙江省中医药管理局资助课题2010ZB026;浙江中医药大学重点课题2009ZZ05;浙江省科技厅新苗人才计划项目67401219;浙江中医药大学校级课题17108015
2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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