环介导等温扩增法鉴定检测冬虫夏草
目的 建立冬虫夏草的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,实现对冬虫夏草的快速检测.方法 针对冬虫夏草的CS2 serine protease(csp2)基因设计LAMP内外引物对:利用CTAB法提取冬虫夏草DNA;优化扩增反应条件;采用包括冬虫夏草在内的6种不同虫草进行LAMP扩增,并对阳性产物酶切鉴定以检测其特异性,通过对模板DNA的10倍梯度稀释检测其灵敏度;紫外灯下观察凝胶电泳或加入荧光染料SYBR Green Ⅰ的扩增产物.结果 设计的LAMP引物可以特异地针对冬虫夏草的csp2基因进行LAMP扩增,产物可被限制性内切酶Taq1酶切,且有较高的灵敏度,检出限达6 pg/mL.结论 LAMP法可以实现对冬虫夏草的快速鉴定检测,在中药鉴定中有着广阔的应用前景.
冬虫夏草、环介导等温扩增、鉴定、检测、检出限
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R282.5(中药学)
湖北省楚天学者计划项目;武汉市科技局对外科技合作与交流计划项目201070934341
2011-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1605-1608
