天门冬ISSR分子标记技术的建立与体系优化

摘要：

目的 建立并优化天门冬ISSR-PCR反应体系和扩增程序,为探讨天门冬种质间遗传多样性提供依据.方法 采用单因子试验和正交设计法,研究Mg2+、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA、延伸时间及循环次数对PCR扩增的影响.结果 天门冬ISSR-PCR的最佳反应体系为25 μL的反应体系中含模板DNA40 ng、Mg2+1.25 mmol/L、dNTP 320 μmol/L、引物1.2 μmol/L、Taq DNA聚合酶1.5 U.在此基础上,从50条引物中筛选出13条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度.结论 建立的天门冬ISSR-PCR反应体系,经过17份天门冬种质检验,证明该体系稳定可靠,可用于天门冬遗传分析.

关键词：天门冬、ISSR-PCR、正交设计、单因子试验、遗传分析

所属期刊栏目：42

分类号：R286.1(中药学)

资助基金：湖南省高校创新平台开放基金09K106;湖南省科技计划重点项目2009FJ2008

在线出版日期：2011-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：353-357