何首乌cDNA文库的构建及分析

摘要：

目的 为进行药用植物次生代谢产物的生物合成基因调控研究,构建了三年生何首乌叶cDNA文库.方法 以何首乌成熟叶片为材料提取其总RNA;纯化出mRNA;反转录合成双链cDNA;钝化cDNA末端;连接上EcoR Ⅰ接头;经Xho Ⅰ酶切后,使用Sepharose CL-2B凝胶介质滤过,收集400 bp以上的片段与Uni-ZAP XR载体连接,经包装蛋白包装成cDNA文库.Uni-ZAP XR载体可以在辅助噬菌体ExAssist helper phage的共感染下,快速释放出pBluescript SK-噬菌粒.经转染E.coli SOLR后,铺于氨苄青霉素抗性平板.分别利用PCR和双酶切的方法鉴定插入片段的大小.结果 测定该初始文库的滴度为1.07×106pfu/mL,含有5.4×105个重组子,插入片断长度为0.5～2.0 kb;扩增文库的重组子为4.25×1011个,重组率为98.5%.结论 经检测所构建的文库库容量满足基因筛选要求,为进行中药材相关功能基因调控研究奠定基础.

关键词：cDNA文库、何首乌、次生代谢产物

所属期刊栏目：39

分类号：R282.1(中药学)

资助基金：广东省科技厅重点项目资助63108

在线出版日期：2009-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1716-1720