人源PDCD4全长及其MA3功能域的原核表达和蛋白纯化

摘要：

目的:构建细胞程序性死亡因子4(PDCD4)及其MA3功能域的原核表达载体,并在体外表达及纯化蛋白.方法:提取胃癌细胞株7901总RNA,通过反转录获得cDNA,并通过聚合酶链式反应(PCR)扩增PDCD4全长及MA3功能域基因片段,定向连接到pGEX-6P-1原核表达载体.将构建好的原核表达载体转化感受态大肠杆菌BL21,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,采用GST亲和层析的方法获得纯化蛋白,并通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检测和免疫印迹鉴定.结果:PCR获得PDCD4全长及MA3基因片段,成功构建了pGEX-6P-1-PDCD4和pGEX-6P-1-PDCD4-MA3原核表达载体,并在体外表达纯化了GST-PDCD4全长和GST-PDCD4-MA3融合蛋白.结论:构建了PDCD4及其功能域的原核表达载体并在体外表达纯化了目的蛋白,为更好地研究PDCD4的功能奠定了基础.

关键词：PDCD4、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：38

资助基金：国家自然科学基金;湖北省科技厅知识创新专项自然科学基金

在线出版日期：2020-12-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：101-104