不同腹腔灌洗液分离培养原代大鼠腹腔巨噬细胞的效率比较及细胞鉴定

摘要：

目的:探索最优化的腹腔巨噬细胞分离与培养方法,为体外研究巨噬细胞提供一种简便易行、高效的方法.方法:分别用0.9％氯化钠溶液(对照组)、PBS、无血清高糖DMEM、10％血清高糖DMEM灌洗大鼠腹腔5 min,无菌状态下吸出灌洗液,离心后收集腹腔巨噬细胞,对比不同灌洗液获取细胞数量和活性的差异,通过形态观察、HE染色、吉姆萨染色和CD68免疫组织化学染色对培养的腹腔巨噬细胞进行鉴定.结果:统计每毫升不同腹腔灌洗液获得的细胞数,结果发现PBS组和10％FBS高糖DMEM组与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05),无血清高糖DMEM进行腹腔灌洗后获得的细胞数明显多于其他各组(4.13-±0.15)× 106/mL,差异有统计学意义(P＜0.05).台盼兰染色显示DMEM组[(97.83±0.65)％]和10％ FBS DMEM组[(97.90±1.10)％]细胞活性较高,与对照组[(95.50±0.76)％]相比差异有统计学意义(P＜0.05),PBS组[(96.17±1.04)％]细胞活性与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05),所有灌洗液获得巨噬细胞活性均在95％以上.分离培养的细胞经HE染色、吉姆萨染色和CD68免疫组化染色鉴定为巨噬细胞.结论:无血清高糖DMEM是高效获取大鼠腹腔巨噬细胞的灌洗液,该方法是一种简易实用的体外分离大鼠腹腔巨噬细胞的方法.

关键词：腹腔巨噬细胞、大鼠、原代培养、鉴定、免疫组织化学

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资助基金：湖北省教育厅指导项目B2016116;湖北省自然科学基金青年项目2015CFB211;湖北省教育厅科学技术研究项目Q20132104;湖北医药学院附属太和医院国家级项目培育基金2013PY01

在线出版日期：2018-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：418-421,428,封3