重组人白血病抑制因子在大肠杆菌中的表达及纯化

摘要：

目的:利用大肠杆菌表达并制备重组人源白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF).方法:构建pET-30a-rhLIF表达载体并转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)之中,IPTG诱导使无标签的目的蛋白呈可溶性表达,继而利用三步柱层析纯化目的蛋白.最后对所获目的蛋白活性进行测定,并对其N端和C端的完整性分别应用Ed-man测序法以及质谱法进行鉴定.结果:通过三步柱层析以及中间的内毒素去除步骤可使无标签rhLIF获得纯化,检测结果提示所获目的蛋白内毒素水平＜1 EU/μg,其活性同市售商品化LIF产品一致,Edman测序结果提示少部分目的蛋白N端存在甲硫氨酸修饰,质谱检测结果表明所获目的蛋白C端完整性较好.结论:建立了一种新的重组人源白血病抑制因子表达和纯化的方法,本方法不需利用标签蛋白,并可有效降低所获蛋白中内毒素水平,所获rhLIF蛋白可用于干细胞培养以及相关生物学研究.

关键词：人白血病抑制因子、表达、纯化、大肠杆菌

所属期刊栏目：36

分类号：R39;R73

在线出版日期：2017-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：214-220