10.7543/j.issn.1006-9674.2013.06.002
RNAi通过PKR和TLR通路活化天然免疫
目的:研究特异性RNA干扰(RNA interference,RNAi)上调天然免疫的分子机制.方法:分别从土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepatitis virus,WHV)转基因小鼠和WHV慢性感染的土拨鼠分离原代肝细胞,转染针对WHV和小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),同时用特异性siRNA抑制剂和信号通路抑制剂,研究RNA活化蛋白激酶(RNA-activated protein kinase,PKR)、Toll样受体(toll-like receptor,TLR)3、7/8和视黄酸诱导基因Ⅰ(Retinoic acid-inducible geneⅠ,RIG-I)/黑色素瘤分化相关基因5(Melanoma differentiation-associated gene-5,MDA5)等信号通路在RNAi上调天然免疫中的作用,Real-time RT PCR检测靶基因和MxA的mRNA水平,Western blot检测信号通路分子磷酸化PKR、核因子κB(Nuclear Factor κB,NF-κB)和干扰素调节因子(interferon regulator factor,IRF)3的蛋白水平.结果:针对WHV和GAPDH的RNAi介导的黏病毒抵抗蛋白A(myxovirus resistance A,MxA)上调可以被PKR抑制剂和内体酸化抑制剂所阻断,特异性RNAi可以诱导PKR磷酸化和NF-κB与IRF3的核内转位.结论:特异性RNAi介导的靶RNA降解产物可能通过PKR和TLR-3,-7/8通路活化天然免疫.
RNA干扰、土拨鼠肝炎病毒、原代肝细胞、天然免疫
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湖北省自然科学基金2010CDZ036;湖北医药学院优秀中青年科技创新团队项目2011CXX02;湖北医药学院国家级科研项目培育基金2012GPY10
2014-03-12(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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