PEP-1肽介导人过氧化氢酶转导入人脐静脉内皮细胞

摘要：

目的:采用体外培养的人脐静脉内皮细胞株(CRL-1730),研究PEP-1肽介导人过氧化氢酶穿透细胞的能力.方法:构建原核表达质粒pET15b-PEP-1-CAT,将其在基因工程菌中表达出N端带有6个组氨酸"标签"(His-tag)的重组蛋白,并通过金属螯合亲和层析对其进行纯化,然后将纯化得到的PEP-1-CAT融合蛋白加入体外培养的人脐静脉内皮细胞,通过Western blot来分析其转导能力.结果:测序分析证实,原核表达质粒pET15b-PEP-1-CAT重组成功.SDS-PAGE和Western blot结果表明,PEP-1-CAT在E.coli中获得了高效表达,经Ni2+-NTA-树脂柱亲和层析纯化得到了融合蛋白PEP-1-CAT,并在体外检测到其具有特异的过氧化氢酶活性,活性值为77.1 U/g.将其加入到体外培养的内皮细胞培养基中,发现它能以剂量依赖及时间依赖的方式转导入细胞内,并能保持酶活性达48 h.结论:PEP-1-CAT融合蛋白能高效地转导入人脐静脉内皮细胞,为防治各种与氧化应激损伤有关的疾病开辟了新的途径.

关键词：过氧化氢酶、PEP-1肽、蛋白转导、脐静脉内皮细胞

所属期刊栏目：26

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2007-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：9-12,封三