菌体内同源重组构建pAdEasy-1-Cat重组体

摘要：

目的:利用大肠杆菌BJ5183细菌内同源重组构建重组腺病毒载体. 方法: 自过氧化氢酶质粒载体pZeoSV2-Cat中酶切出Cat cDNA,亚克隆至质粒pBluescriptⅡsk(+)中,形成pBluescriptⅡsk(+)-Cat,自pBluescriptⅡsk(+)-Cat中酶切出Cat cDNA,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,形成转移质粒pShuttle-CMV-Cat,在感受态大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,得到重组腺病毒载体pAdEasy-1-Cat.对pAdEasy-1-Cat进行酶切鉴定和PCR鉴定. 结果: 线性化的pShuttle-CMV-Cat转化含pAdEasy-1的超感受态大肠杆菌BJ5183,24 h后获得了30%阳性重组质粒克隆,经酶切获得一大于20 kb的大片段和一4.5 kb的特征性条带,PCR反应扩增出209 bp片段. 结论: 应用细菌内同源重组能快速构建含Cat基因的重组腺病毒载体pAdEasy-1-Cat,为过氧化氢酶基因的研究及应用Cat基因进行再狭窄的防治研究奠定了基础.

关键词：同源重组、腺病毒载体、基因、过氧化氢酶、基因治疗、细菌

所属期刊栏目：22

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：湖北省科技厅科技攻关项目2001AA307B07

在线出版日期：2004-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：193-196