反义VEGF165腺病毒重组体的构建及鉴定

摘要：

目的：构建含人反义血管内皮生长因子165(VEGF165)基因的重组腺病毒载体，为采用反义VEGF165RNA防治肿瘤的研究奠定基础。方法：将人VEGF165 cDNA反向插入到穿梭质粒pHCMVSP1A的CMV启动子之下，即pAd-ahVEGF165。后者与pJM17通过脂质体共转染293细胞，经同源重组获得含人反义VEGF165基因的重组腺病毒Ad-ahVEGF165。通过PCR共扩增法鉴别Ad-ahVEGF165的正确与否。根据260nm的紫外光吸收值计算病毒滴度。结果：VEGF165 cDNA成功地反向插入了pHCMVSP1A载体，以重组病毒基因组DNA为模板，同时扩增出了576bp的反义VEGF165基因片段和860bp的腺病毒骨架基因片段，证实了Ad-ahVEGF165的正确性。病毒滴度为5.6×1011 pfu/ml。结论：成功构建了携带人反义VEGF165基因的腺病毒Ad-ahVEGF165，本研究为采用反义VEGFRNA途径治疗肿瘤的在体、离体实验奠定了基础。

关键词：内皮生长因子、腺病毒、RNA、反义、基因扩增

所属期刊栏目：20

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

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