来源于不同表达菌株的β-葡聚糖酶酶学性质比较

摘要：

β-葡聚糖酶是大曲中重要的水解酶系,在大曲发酵过程中起着水解原料细胞壁和释放胞内淀粉的作用.NFEg16A是首个从浓香型大曲中挖掘到的β-葡聚糖纯酶,其表达系统为大肠杆菌表达系统Escherichia coli BL21.NFEg16A耐热性极好,但酶活却很低.为了提升该酶的酶学性质,成功实现了该酶在Pich7iapastorisX33中的异源表达,并将来源于不同表达系统的NFEg16A酶学性质进行对比,从糖基化的角度分析产生这种差异的原因.结果表明,来源于毕赤酵母表达系统的β-葡聚糖酶NFAmy16A-Pichia相较于来源于大肠杆菌表达系统的β-葡聚糖酶NFAmy16A-E.coli,比活提升约40％.NFAmy16A-E.coli最适反应条件为pH 7和70℃;在弱酸性的条件下pH稳定性较好;在50℃时热稳定性最好.NFAmy16A-Pichia最适反应条件为pH 5.5和65℃;在中性条件下pH稳定性最好;且温度耐受范围很广,在30-90℃下热稳定性都很好.对NFAmy16A的糖基化位点进行预测,发现该酶有5个糖基化位点,分别为4个O-糖基化位点(164、168、187、240)和1个N-糖基化(295)位点.本研究表明,可能是因为NFAmy16A在毕赤酵母中发生糖基化反应,从而造成了蛋白质结构的变化从而导致其酶学性质发生改变.

关键词：β-葡聚糖酶、NFEg16A、Escherichia coli BL21、Pichia pastoris X33、酶学性质、糖基化

所属期刊栏目：28

分类号：Q554;Q786;Q936

资助基金：四川省教育厅科技重点研究项目;中国轻工业浓香型白酒固态发酵重点实验室开放基金项目

在线出版日期：2023-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1312-1317