结核分枝杆菌DNA复制解旋酶与引物酶的相互作用

摘要：

在细菌DNA复制过程中,DnaB解旋酶解开双链DNA为DNA聚合酶提供单链模板,DnaG引物酶合成引物支持后随链的合成,DnaB和DnaG紧密协调保证了DNA复制得以精确完成.目前对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)染色体复制机制仍然知之甚少,有关结核分枝杆菌DnaB和DnaG相互作用的研究还非常有限.重组表达了Mtb解旋酶DnaB和引物酶C端结构域(MtbPl6),经过亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析制备得到高纯度目的蛋白.孔雀石绿定磷法检测MtbDnaB ATP水解活性表明,MtbDnaB六聚体状态下ATP水解活性较单体时提高5.4倍;当加入MtbP16,可以使MtbDnaB的ATP水解活性提高15％.利用凝胶迁移实验(Electrophoretic mobility shift assays,EMSA)分别检测MtbDnaB与ssDNA、MtbDnaB与MtbP1相互作用,发现可以形成稳定的MtbDnaB/ssDNA和MtbDnaB/MtbP16复合物.进一步研究发现,当将MtbP16蛋白加入到MtbDnaB/ssDNA中,随着MtbP16的增加,并未检测到MtbDnaB/ssDNA/MtbP 16三元复合条带,反而导致游离ssDNA逐渐增多.上述结果表明,MtbDnaB可以与MtbP16形成稳定的二元复合物,MtbP16的结合可以增强MtbDnaB的ATPase活性,未来可进一步以MtbDnaB/MtbP16复合物为靶标,通过定磷法测定MtbDnaB/MtbP16复合物ATPase酶活进行抑制剂筛选.

关键词：DNA复制、解旋酶、引物酶、ATP酶活、相互作用

所属期刊栏目：25

分类号：Q936(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;中国科学院"百人计划"

在线出版日期：2020-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1486-1491