香蕉几丁质酶基因ChiI2超表达载体和干涉表达载体的构建

摘要：

分离克隆栽培香蕉中的几丁质酶基因ChiI2,构建超表达载体和干涉表达载体,可为进一步研究ChiI2基因响应抗逆胁迫的功能提供基础.从栽培香蕉天宝蕉(Musa spp.,AAA)中克隆几丁质酶基因ChiI2,利用生物信息软件对该基因进行分析,并用无缝克隆技术分别构建ChiI2的超表达载体和干涉表达载体.从香蕉果皮中克隆到一个几丁质酶基因ChiI2,该基因全长942 bp,蛋白编码313个氨基酸,其编码的蛋白质理论分子量(Mr)为32.96,等电点(pI)为6.77.ChiI2蛋白的α-螺旋结构有6个,β-折叠结构有5个,转角结构有33个.蛋白质疏水性预测分析值为-0.233,属于亲水性蛋白.功能保守域分析表明,该蛋白是糖苷水解酶家族几丁质酶家族的一员.该基因核苷酸序列推导的氨基酸与野生香蕉、玉米、水稻、小麦、莲等植物的同源性都在70％以上.对ChiI2基因进行荧光定量PCR检测,发现4℃处理6h的表达显著高于对照和38℃处理6h,表明ChiI2基因可能与低温响应有关,诱导香蕉苗产生抗冷性.利用无缝克隆技术成功构建了pGreenⅡ-ChiI2超表达载体和pGreenⅡ-ChiI2i干涉表达载体,并转化到农杆菌EHA105菌株中.本研究成功地从栽培香蕉天宝蕉中分离克隆到了ChiI2基因,并对其基因特点和蛋白功能进行了预测分析,成功构建了超表达载体和干涉表达载体,可为进一步研究其功能奠定基础,也为采用基因工程方法改良选育香蕉抗寒品种提供了新尝试.

关键词：香蕉、几丁质酶、干涉表达载体、超表达载体、无缝克隆

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分类号：S668.1;Q78(果树园艺)

资助基金：福建省教育厅中青年教师教育科研项目;福建省自然科学基金面上项目;国家自然科学基金;博士后启动基金;现代农业产业技术体系建设专项;福建农林大学科技创新专项基金;福建农林大学科技创新专项基金;福建农林大学科技创新专项基金;福建省高原学科建设经费资助

在线出版日期：2019-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：672-678