适用于流式细胞术的三角褐指藻核DNA染色方法

摘要：

为制备可用于配置有488 nm激发器的流式细胞仪检测核DNA含量的三角褐指藻细胞,取对数生长期的三角褐指藻细胞,分别采用70％乙醇、1％戊二醛、1％甲醛溶液进行细胞固定,经RNase A消化后的样品用碘化丙啶(PI)染色,用SYBR-green Ⅰ对未经RNase A消化的细胞染色,在荧光显微镜下观察细胞染色情况,用流式细胞仪检测细胞核DNA含量.结果显示:在荧光显微镜下观察到,3种不同固定液固定的细胞均表现为SYBR-green I只对藻细胞核染色,PI对于藻的细胞核与细胞质均有着色.流式结果的DNA直方图显示,SYBR-green Ⅰ染色的细胞的DNA直方图有明显的G1与G2/M峰,拟合度(RCS)在3左右,变异系数(CV)在8.6％左右.而PI染色细胞的DNA直方图表现为变异系数值偏大,拟合度较低,没有明显的G1与G2/M峰.本研究表明,SYBR-green Ⅰ一种无需对细胞进行RNase A处理,可应用于配置有488 nm激光器流式细胞仪的核酸染料,可为研究在整个细胞周期的调控机制奠定基础,同时也为其他浮游植物细胞核的染色提供参考.

关键词：三角褐指藻、流式细胞术、碘化丙啶(PI)、SYBR-greenⅠ、细胞核DNA染色

所属期刊栏目：24

分类号：Q179.1;Q2-33(水生生物学)

资助基金：国家自然科学基金;四川省科技厅项目

在线出版日期：2019-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1270-1274