产甘油假丝酵母甘油分解代谢CgGCY1、CgGCY2和CgDAK基因的克隆、敲除及其功能

摘要：

产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)能够利用甘油大量生长菌体而无有机酸、醇等代谢物积累,是潜在的优良宿主细胞.为了解C.glycerinogenes-甘油分解代谢途径,成功克隆得到二羟基丙酮(DHA)途径的编码基因CgGCY1、CgGCY2和CgDAK.利用“Ura-Blaster”敲除盒分别构建的缺失突变菌Cggcy1△/gcy2△和Cgdak均不能在甘油培养基中生长.qRT-PCR及酶活测定结果显示,与葡萄糖培养相比,甘油培养下细胞通过强化糖异生、HMP途径积累生物量,下调EMP途径和副产物合成关键酶表达以弱化有机酸、醇的合成,同时上调TCA循环以补偿EMP途径下调带来的能量和还原力不足,使得生物量提高24.5％而不积累有机酸、醇等代谢物.以甘油为共底物进行木糖发酵,木糖醇产量和转化率达到39.4 g/L和89％,与葡萄糖为共底物相比分别提高了79％和32.8％.本研究表明C.glycerinogenes甘油分解代谢仅依赖于DHA途径,以甘油为共底物更有利于木糖醇的合成和转化;结果可为代谢改造C.glycerinogenes 以甘油为共底物合成高附加值化合物打下基础.

关键词：产甘油假丝酵母、甘油分解代谢、甘油脱氢酶、二羟丙酮激酶

所属期刊栏目：23

分类号：Q786;Q939.9(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2018-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：999-1005