多点突变提高DhaA对芥子气的活性和热稳定性

摘要：

为提高烷基卤脱卤酶DhaA对芥子气的活性和热稳定性,采用Autodock软件计算DhaA突变前后与芥子气的结合情况,利用重叠延伸PCR和DNA无缝拼接结合的方法,改变DhaA活性空腔进出口通道的大小,构建包含5个位点的DhaA突变体(Ile135Phe+ Cys176Tyr+ Va1245Phe+ Leu246Ile+ Tyr273Phe);将DhaA及其突变体构建在pET-28a载体上后,在Escherichia coli BL21 (DE3)中进行表达,比较纯化后的野生型与突变体在酶学性质方面的变化情况.Autodock分子对接结果显示,突变后的DhaA与芥子气的结合能、结合效率和抑制常数均小于野生酶,突变体对芥子气的比活性提高了1.4倍,对10 mg/mL芥子气的降解率提高了近20％.热稳定性实验发现,DhaA突变体在50℃水浴1h后残余酶活为76％,比野生型DhaA提高了19％.Dh aA突变体的Tm值为56℃,比野生型DhaA提高了6℃.综上表明改变DhaA活性空腔内的进出口通道可以提高DhaA的热稳定性和对芥子气的催化活性.

关键词：多点突变、进出口通道、DhaA、芥子气、催化活性、热稳定性

所属期刊栏目：23

分类号：X172;Q55(环境生物学)

在线出版日期：2017-10-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：714-718