盐生杜氏藻CPD光裂合酶FAD结合结构域Gln336在逆境胁迫下的修复活性
为了解盐生杜氏藻环丁烷嘧啶二聚体(CPD)光裂合酶的作用机制,通过定点突变的方法对其黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)结合结构域a13中保守氨基酸残基Gln336进行突变,并比较野生型菌株PGEX-4T-1-DsPHR2 (WT)和突变菌株PGEX-4T-1-DsPHR2-Q336H (Q336H)表达的光裂合酶在体内外的光修复活性及其在不同盐浓度下修复光损伤的效果.结果显示:采用DpnI法定点突变,成功获得盐生杜氏藻CPD光裂合酶突变体Q336H的基因,构建表达载体并导入到大肠杆菌BL21 (DE3)中,构建了突变菌株Q336H.体内外活性研究发现,野生型菌株的CPD光裂合酶的活性显著大于突变菌株Q336H (P＜ 0.05).在不同盐浓度条件下,野生型菌株存活率基本没有变化,而突变菌株Q336H随着盐浓度增加存活率迅速下降.在体外修复实验中,甘油浓度对突变酶Q336H活性影响显著大于对CPD光裂合酶活性影响(P＜0.05).甘油浓度增加导致突变酶Q336H修复活性逐渐下降,而CPD光裂合酶活性变化趋势是先增加后下降.因此,Gln336对盐生杜氏藻CPD光裂合酶活性具有重要影响,而且可能是该酶在盐胁迫下发挥功能的关键氨基酸残基.
CPD光裂合酶、作用机制、FAD结合结构域、保守氨基酸、盐生杜氏藻
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Q55;Q949.212.06(酶)
国家自然科学基金项目31670078;四川省科技厅项目2014GZX0005、 2017TJPT0001;国家微生物资源平台NIMR-2016-8-1资助 Supported by the National Natural Science Foundation of China31670078;the Science and Technology Department of Sichuan Province2014GXZ0005,2017TJPT0001;the National Infrastructure of Natural Resources for Science and Technology Program of ChinaNIMR-2016-8-1
2017-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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