羟丙基-β-环糊精对新金色分枝杆菌合成ADD蛋白质组的影响
新金色分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum JC-12)可降解植物甾醇合成药物中间体雄甾-1,4-二烯-3,17二酮(ADD),由于植物甾醇的溶解度较低,因此在转化体系中添加羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)作为助溶剂.本次研究在HP-β-CD存在与否条件下利用二维凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱技术(MALDI-TOFMS)分离和鉴定新金色分枝杆菌蛋白质表达量的差异;再使用反转录实时荧光定量PCR (RT-qPCR)对挑选出的5个与ADD合成相关的蛋白质编码基因进行转录水平分析.结果表明,2-DE图谱及质谱结果共鉴定到12个具有显著差异表达量的蛋白质点.其中,参与植物甾醇降解合成ADD途径的乙醇脱氢酶、烯酰-CoA水合酶、乙酰-CoA乙酰基转移酶、3α,7a,12α-三羟基-5β-胆甾-24-烯酰-CoA水合酶和4,5-9,10-双断裂-3-羟基-5,9,17三氧雄甾-1(10),2-二烯-4-酸酯水解酶的蛋白质表达量在羟丙基-β-环糊精存在条件下显著提高;参与糖、脂、氨基酸和核酸类物质代谢的乙二醛酶、3-氧代酰基-ACP合酶、3-酮脂酰-ACP还原酶、分支酸合酶、氮调节蛋白P-Ⅱ和DNA结合蛋白的蛋白质表达量也有一定的提高,但磷酸甘油酸变位酶的蛋白质表达量有所下降.通过RT-qPCR分-析的转录水平的变化情况与2-DE得到的蛋白水平的结果相符.综上所述,羟丙基-β-环糊精可促进降解植物甾醇合成ADD代谢途径及糖、脂、氨基酸和核酸类物质代谢途径相关酶的表达量.
植物甾醇、羟丙基-β-环糊精、新金色分枝杆菌、双向电泳、实时荧光定量PCR
22
Q939.9;Q936(微生物学)
国家高技术研究发展计划863计划项目2011AA02A211,SS2015AA021004、国家自然科学基金项目31570085、中央高校基本科研业务费专项资金JUSRP51306A、高等学校博士学科点专项科研基金20110093120001和江苏高校优势学科建设工程资助项目资助 Supported by the High-tech Research and Development Programs of China 863 Program,2011AA02A211,SS2015AA021004,the National Natural Science Foundation of China 31570085,the Fundamental Research Funds for the Central Universities JUSRP51306A,the Specialized Research Fund for the Doctoral Program of Higher Education 20110093120001 and the Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education Institutions
2017-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1117-1121
