产大分子levan的果糖基蔗糖转移酶的原核表达及酶学性质
Levan型果聚糖是由微生物通过果糖组成的一个均聚物,寻找可以产均一度高的大分子果聚糖的果糖基蔗糖转移酶对其工业应用具有十分重要的意义.本研究克隆了来自运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis,SCTCC102250)的果糖基蔗糖转移酶基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功实现表达.通过His-tag柱层析对表达的果糖基蔗糖转移酶进行纯化,将纯化的酶与底物蔗糖反应,经乙醇沉淀得到多糖样品,利用凝胶色谱法确定了其分子量(Mr)的大小为2×106.多糖酸水解后的样品Rt与果糖标准品的Rt保持一致,表明该聚合物为levan果聚糖.最后,通过研究果糖基蔗糖转移酶的酶学性质,确定其最适温度为40℃,最适pH为6.0,Km值为3.95 mmol/L,Vmax为131.58 μmol mL-1 min-1.本研究通过酶法合成得到levan果聚糖,为今后制备大分子levan果聚糖提供了理论依据.
levan果聚糖、果糖基蔗糖转移酶、原核表达、蛋白纯化、酶学性质
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TQ925;Q78(其他化学工业)
“十二五”科技支撑计划项目2014BAD02B02、国家自然科学基金项目31272659和四川省科技厅项目213GZX0161-3、2014GZX0005、2013HH0007、2013GZ0058、15010302、2012GE0008、ARRLKF14-04资助 Supported by the Sci-tech Pillar Project of the Twelfth Five-year Plan of China 2014BAD02B02,the National Natural Science Foundation of China 31272659,and the Science and Technology Department of Sichuan Province 213GZX0161-3、2014GZX0005,2013HH0007,2013GZ0058,15010302、2012GE0008、ARRLKF14-04
2016-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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