基于缺口酶的链置换等温扩增技术

摘要：

传统的链置换等温扩增技术中需要加入修饰的底物,为了解决这一技术难题,实现常规底物下的链置换等温扩增技术,采用缺口酶Nt.BstNBI代替传统链置换等温扩增技术中的限制性内切酶,通过优化两种酶的比例、反应温度、反应时间、两种原装buffer的比例、buffer中的离子浓度等反应条件和引物浓度、引物序列以及引物前端保护序列的长度,最终建立了一种新型的链置换等温扩增技术.该方法可以检测到2 pmol/L的质粒DNA.扩增反应在15-30 min即可完成,并且产物可通过琼脂糖凝胶电泳进行直接检测.本研究建立的基于缺口酶的链置换等温扩增技术较之传统方法更加简便、快捷、环保且价格低廉,具有非常强的实际应用潜力,特别适用于现场检测.

关键词：缺口酶、等温扩增、剪切、链置换扩增

所属期刊栏目：21

分类号：Q5-3

资助基金：国家自然科学基金项目21402189,21322208和四川省科技支撑计划项目苗子工程,2014RZ0022资助 Supported by the National Natural Science Foundation of China 21402189,21322208,and the Science and Technology Support Program of Sichuan Province 2014RZ0022

在线出版日期：2016-03-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1080-1085