一种新型抗性质粒的构建及其在核黄素生产菌中的运用
枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis RF1是课题组前期通过基因工程改造得到的一株核黄素高产菌,为了进一步提高核黄素的产量,需要对该菌株进行进一步的基因工程改造.本研究首先将编码的链丝菌素乙酰基转移酶基因sat克隆到pMA5质粒上,构建具有诺瓦丝菌素Norseothricin (NTC)抗性的重组质粒pMA5-sat,实验证实该重组质粒能够用于B.subtilis RF1的抗性筛选.随后将核黄素合成相关的关键酶葡萄糖-6-磷酸脱氢酶编码基因zw克隆到重组质粒pMA5-sat上,获得重组质粒pMA5-sat-zwf并成功构建重组菌B.subtilis RF1/pMA5-sat-zwf.结果显示,重组菌胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活力比原始菌提高了近50倍,说明葡萄糖-6-磷酸脱氢酶在重组菌中成功过量表达;根据发酵特性分析,重组菌B.subtilis RF1/pMA5-sat-zw最终核黄素产量达到12.01 g/L,比原始菌B.subtilis RF1提高了30.3％.综上,本研究构建的新型抗性质粒能够成功运用于核黄素生产菌枯草芽孢杆菌的基因工程改造.
枯草芽孢杆菌、抗性质粒、核黄素、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶
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Q78;Q936(基因工程（遗传工程）)
国家重点基础研究发展计划973计划项目2012CB725202、国家自然科学基金项目31400082、教育部重点基金113033A、江苏高校优势学科建设工程资助项目和江苏省现代发酵工业协同创新中心资助 Supported by the State Key Basic R & D Program of China 973 Program,2012CB725202,the National Natural Science Foundation of China 31400082,the Research Project of Chinese Ministry of Education 113033A,the Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education Institutions,and the Collaborative Innovation Center for Advanced Industrial Fermentation of Jiangsu Province
2015-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
435-440
