粘红酵母△12-脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达

摘要：

△12-脂肪酸脱氢酶一般特异性催化在油酸的△12位引入双键转变成亚油酸.为了从粘红酵母YM25079中克隆全长△12-脂肪酸脱氢酶基因序列,参考已知的△12-脂肪酸脱氢酶基因序列设计基因特异性引物,通过PCR扩增获得到全长为l 353 bp的cDNA序列,序列分析结果表明该序列具有一个编码450个氨基酸的完整开放阅读框,所编码蛋白质的大小为50.9×103.与报道的△12-脂肪酸脱氢酶一样,推测的氨基酸序列具有膜整合脂肪酸脱氢酶特异性的3个组氨酸保守区,表明该序列为一个新的编码△12-脂肪酸脱氢酶的基因.为了验证其功能,把开放阅读框序列亚克隆到表达载体pYES3/CT,构建重组表达载体pYRGD12,并转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVScl进行表达.脂肪酸气相色谱(GC)分析表明,该序列所编码的蛋白质具有△12-脂肪酸脱氢酶活性,能将油酸转化为亚油酸,亚油酸的含量占酵母总脂肪酸的4.31％.以上结果表明,PCR所获得序列是新的△12-脂肪酸脱氢酶基因.

关键词：粘红酵母、12-脂肪酸脱氢酶、亚油酸、克隆和表达

所属期刊栏目：21

分类号：Q78;Q936(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目31160016,31260034、云南省应用基础研究基金资助项目KKSA201126005和教育部回国人员科研启动基金KKQA201226003资助 Supported by the National Natural Science Foundation of China 31160016,31260034,the Application and Basic Research Fund of Yunnan Province KKSA201126005,and the Scientific Research Foundation for Returned Overseas Chinese Scholars,State Education Ministry of China KKQA201226003

在线出版日期：2015-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：421-426