黑曲霉木聚糖酶XynB耐热性的定向改造及表达、纯化
酶活性高的木聚糖酶在工业中具有巨大应用潜力,但大部分野生木聚糖酶不能耐受工业生产过程中的极端环境比如高温,因此很有必要通过分子生物学的方法改造木聚糖酶.本文通过分子动力学模拟和定点突变的方法以提高黑曲霉(SCTCC400264)来源的木聚糖酶XynB的耐热性.利用定点突变技术获得突变载体pET32a-XynB-T79V并转化大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3),经IPTG诱导成功表达木聚糖酶XynB-T79V.在镍亲和层析纯化蛋白后测定了突变酶的耐热性.突变体XynB-T79V在30、40、50℃处理120 min后酶活几乎没有损失,当处理温度升高到60-80 ℃时,酶活开始下降.温度升到80℃时,残余酶活仍有37％,而此时野生型XynB的活性几乎完全丧失.突变体XynB-T79V半衰期t1/2提高了8.7min.本研究获得的突变酶XynB-T79V耐热性显著提高,为工业应用提供了新的酶资源.
木聚糖酶、耐热性、分子动力学模拟、定点突变、理性设计
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Q78;Q939.9(基因工程（遗传工程）)
国家“十二五”科技支撑计划项目2013BAD10B01,2014BAD02B02、国家自然科学基金项目31171447和四川省科技支撑项目2013HH0007,2013GZX0161-3,2013GZ0058资助;Supported by the National Sci-tech Pillar Project of the Twelfth Five-year Plan of China 2013BAD10B01,2014BAD02B02,the National Natural Science Foundation of China 31171447,and the Sichuan Science and Technology Pillar Program 2013HH0007,2013GZX0161-3,2013GZ0058
2015-02-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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