漆酶基因lac1338在大肠杆菌中的表达条件优化及其染料降解作用
在摇瓶水平上,采用单因素试验方法,对已构建好的表达漆酶蛋白HIS-Lac1338的工程菌BL21(DE3)/pET32a(+)-lac1338的诱导表达条件进行优化,以期提高蛋白产量,降低生产成本.研究了培养温度、诱导时间、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、铜离子(Cu2+)浓度等不同条件对HIS-Lac1338表达量和活性的影响.通过聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)分析确定最佳表达条件,用酶标仪测其酶活性.结果显示,温度为30℃,初始菌体浓度D600nm为1.6,加终浓度为0.2 mmol/L的IPTG及终浓度0.5 mmol/L的Cu2+,培养16 h,融合蛋白表达量提高了约2.5倍,为450 mg/L,是已报道的最高表达量;以2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)为底物测纯酶的比酶活为22.8 U/mg.染料降解作用显示其对刚果红和靛红有95％以上的降解能力.研究表明,工程菌BL21(DE3)/pET32a(+)-lac1338产漆酶量高且大部分为可溶性蛋白,可以快速生产,具有较好的应用价值.
漆酶、大肠杆菌、表达条件优化、染料降解
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Q78;X172(基因工程（遗传工程）)
国家自然科学基金项目30970107、广东省科技厅项目2012B010300021和广东省教育厅项目2013KJCX0107资助;Supported by the National Natural Science Foundation of China 30970107,the Project of Guangdong Provincial Department of Science and Technology 2012B010300021 and the Project of Guangdong Department of Education 2013KJCX0107
2015-02-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1076-1081
