拟南芥基因组中注释为异胡豆苷合成酶的基因克隆及异源表达
拟南芥(Arabidopsis thaliana)是生物学研究中广泛使用的模式生物.到目前为止,没有证据表明拟南芥中存在复杂生物碱,但对其基因组数据的生物信息学分析表明,有很多基因与萜类吲哚生物碱(TIAs)生物合成途径中的相关基因有高度的同源性.为了从分子水平研究拟南芥是否具有合成该类复杂生物碱的潜力,首先对拟南芥中可能编码异胡豆苷合成酶(STR)的15个基因及其编码的酶进行广泛的生物信息学分析和计算;在此基础上,选择其中5个AtSTR基因为目的基因,设计特异性引物;从拟南芥中提取总RNA,一步法RT-PCR克隆得到上述基因;通过TA克隆将上述基因转入pGM-T载体,筛选、酶切及PCR鉴定,DNA测序验证它们的核酸序列;将测序验证的AtSTR基因经过PCR扩增、质粒构建、转入Escherichia coli BL21 (DE3)中进行异源表达和蛋白纯化;在整体细胞、细胞裂解液、细胞裂解液上清和纯化蛋白共4个层次进行AtSTR酶功能表征,未发现目标产物或新产物的生成;上述基因的具体功能还有待进一步研究.图8表3参22
萜类吲哚生物碱、异胡豆苷合成酶、拟南芥、RT-PCR、PCR、异源表达
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Q946.88;Q78(植物学)
中国科学院知识创新工程领域前沿项目、"西部之光"联合学者项目、生命科学领域优秀青年科技专项KSCX2-EW-Q-6;国家自然科学基金面上项目21172216
2013-07-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
224-230
