拟南芥基因组中注释为(S)-去甲乌药碱合成酶的分子克隆异源表达
至今在拟南芥中尚未发现复杂生物碱,但是其基因组测序则表明有35个以上基因可编码(S)-去甲乌药碱合成酶(NCS).本研究首先以经过生化表征、机理清楚的来自罂粟、日本黄连、黄唐松草和花菱草的NCS为参考,与拟南芥中注释的NCS进行了广泛的生物信息学分析与比对,从中选择5个AtNCS为目的基因,设计特异性引物；从拟南芥中提取总RNA,一步法RT-PCR克隆得到上述基因；通过TA克隆将上述基因转入pGM-T载体,筛选、酶切及PCR鉴定,DNA 测序验证它们的核酸序列；将测序验证的AtNCS基因经过PCR扩增、质粒构建、转入Escherichia coli BL21 (DE3)中进行异源表达和蛋白纯化；在整体细胞、细胞裂解液、细胞裂解液上清和纯化蛋白共4个层次进行了AtNCS酶功能表征,未发现目标产物或新产物的生成；上述基因的具体功能还有待进一步研究.
分子克隆、RT-PCR、异源表达、(S)-去甲乌药碱合成酶、苄基异喹啉
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Q946;Q78(植物学)
中国科学院知识创新工程领域前沿项目、"西部之光"联合学者项目、生命科学领域优秀青年科技专项KSCX2-EW-Q-6;国家自然科学基金面上项目21172216;the Forefront Program,the "Western Light" Joint Project,and the Science and Technology Project for Outstanding Youths in Life Science No.KSCX2-EW-Q-6 from the Chinese Academy of Sciences,and the National Natural Science Foundation of China21172216
2013-05-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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