定点突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的改善

摘要：

利用重叠延伸PCR方法对扩展青霉脂肪酶基因进行体外定点突变,构建了K115R与随机突变体ep8双突变的重组质粒pAO815-ep8-K115R.将该质粒电转化到毕赤酵母GS115中进行异源表达,获得双突变体脂肪酶PEL-ep8-K115R-GS.与野生型脂肪酶PEL-GS和随机突变体脂肪酶PEL-ep8-GS进行比较,发现双突变体脂肪酶PEL-ep8-K115R-GS在40℃温浴30 min后残余酶活为89％,比野生型脂肪酶PEL-GS和随机突变体脂肪酶PEL-ep8-GS分别提高54％和27％；双突变体脂肪酶PEL-ep8-K115R-GS的Tm值为42.2℃,比野生型脂肪酶PEL-GS提高3.5℃,比随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS 提高2.0℃.研究结果表明对扩展青霉脂肪酶的分子改造能提高其热稳定性.

关键词：扩展青霉、脂肪酶、定点突变、毕赤酵母、热稳定性

所属期刊栏目：19

分类号：Q814;Q939.9(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金项目30270033;福建省自然科学基金项目B0120001,C0410009;福建工业微生物研发平台建设项目2006H0085

在线出版日期：2013-05-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：43-47