顺丁烯二酸异构酶工程菌发酵条件优化

摘要：

为提高重组大肠杆菌中顺丁烯二酸异构酶表达量,通过正交试验设计,对工程菌的生长条件和目的蛋白可溶表达条件进行优化.采用250 mL三角瓶中装有50 mL( Amp 100 mg L-1)的培养基,分别研究培养基中葡萄糖、蛋白胨、酵母浸粉的浓度,培养基pH值以及摇床转速、装液量、接种量等对蛋白可溶表达量的影响.确定顺丁烯二酸异构酶工程菌最优化培养基为:蛋白胨20 gL-1、酵母浸粉2.5gL-1、K2HPO4·3H2O 3.0 g L-1、KH2PO4 1.5 G L-1、NaC1 6 G L-1、MgSO43gL-1,培养基pH调至6.5.确定顺丁烯二酸异构酶工程菌可溶性表达最优条件为:37℃下培养至D600nm值为1.0时,添加终浓度为0.05 mmol L-1的IPTG进行诱导,诱导温度37℃,摇床转速220 r min-1,装液量20%,接种量5%,诱导时长为6h.利用BioFl0 415发酵罐以最优化的培养基和发酵条件对该工程菌进行了3批发酵实验,与摇瓶实验相比,顺丁烯二酸异构酶的表达量提高了近1.5倍,单位发酵液的酶活力由46 U mL-1发酵液提高到78 U mL-1发酵液.以上数据为顺丁烯二酸异构酶重组工程菌的中试发酵奠定了基础.

关键词：顺丁烯二酸异构酶、发酵条件优化、重组工程菌、正交试验设计、酶活力

所属期刊栏目：17

分类号：TQ925;Q784(其他化学工业)

资助基金：中国科学院知识创新工程重要方向项目;中国科学院知识创新工程重要方向项目

在线出版日期：2011-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：558-562