木聚糖酶基因xynB在不同大肠杆菌表达系统中的表达比较

摘要：

从黑曲霉(Aspergillus niger)n1-1中克隆获得木聚糖酶基因xynB.该基因全长745 bp,含有67 bp内含子,与公布的黑曲霉xynB基因有较高的同源性.将PCR扩增的木聚糖酶成熟肽基因和含有信号肽的基因分别连接到表达载体pTrc-99a和pET-20b 上获得重组质粒pTrc-99a-xynB、pTrc-99a-xynB(S)、pET-20b-xynB和pET-20b-xynB(S),并转化到大肠杆菌Topl0 F'、DH10B和两种BL21宿主中获得重组菌株.通过IPTG诱导,xynB基因在重组菌株中获得特异性表达.表达产物以胞内可溶性蛋白和不溶性包涵体形式存在.诱导4 h,重组菌株pTrc-99a-xynB[BL21 condon plus(DE3)]表达量最高,胞内酶活达到299 IU/L.重组质粒pTrc-99a-xynB(S)在不同宿主胞内和胞外均能分泌目的蛋白,诱导10 h,胞外酶活pTrc-99a-xynB(S)[BL21 condon plus(DE3)]达到347 IU/L.而pET-20b-xynB(S)在两种BL21宿主中均不表达.经SDS-PAGE分析,以pTrc-99a和pET-20b作为表达载体时,重组蛋白相对分子质量分别约为45×103和30×103.与pET-20b相比,pTrc-99a以及自身信号肽的引导更有利于重组木聚糖酶的表达.

关键词：木聚糖酶、xynB基因、大肠杆菌、重组表达、信号肽、黑曲霉

所属期刊栏目：17

分类号：Q949.327.106;Q786(植物学)

资助基金：国家自然科学基金;江苏省自然科学基金

在线出版日期：2011-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：100-103