中药青蒿鲨烯合酶的大肠杆菌表达、纯化与功能鉴定

摘要：

利用PCR方法,将经RACE方法克隆到的中药青蒿鲨烯合酶cDNA(AF302464)开放阅读框的3'末端截短99bp,插入到原核表达载体pET30a(+)的NcoⅠ和BamHⅠ酶切位点之间,构建N端和C端均携带有HIS6表达标签的鲨烯合酶重组表达载体pETSSA.将pETSSA转入大肠杆菌BL21(DE3),0.5 mmol/L IPTG(isopropyl-beta-D-thiogalactoside)28 ℃诱导重组鲨烯合酶的表达.表达产物经镍琼脂糖柱纯化.纯化蛋白加入酶促反应体系(含FPP和NADPH),GC-MS分析酶促反应体系的正己烷萃取物,结果显示重组鲨烯合酶可以催化FPP向鲨烯的转化.青蒿鲨烯合酶的功能鉴定为进一步利用反义或RNAi技术限制甾类生物合成,从而提高青蒿中的青蒿素含量提供了基础.

关键词：鲨烯合酶、大肠杆菌表达、功能鉴定、青蒿

所属期刊栏目：13

分类号：Q786;Q946.8(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30371740

在线出版日期：2007-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：309-312