牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定

摘要：

肠激酶(enterokinase, EK)是一种专一识别DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽键的丝氨酸蛋白水解酶.根据GenBank序列进行人工合成牛肠激酶轻链基因cDNA,测序正确后将其插入甲醇酵母分泌型载体pPICZαA,得到重组质粒pPICZαA/EKL,重组载体经线性化后转化Pichia pastoris SMD 1168H,筛选得到重组牛肠激酶轻链工程菌.分别对重组酵母工程菌进行高密度发酵、 rEKL (recombinant enterokinase light chain, rEKL) 纯化、 N端序列测定、生物学活性鉴定等研究工作.结果表明,发酵上清中rEKL含量高,纯化的rEKL专一性强、无其他杂酶活性、 N端15个氨基酸序列与文献报道一致. 图5 参17

关键词：肠激酶(enterokinase、EK)、甲醇酵母(Pichia pastoris)、高密度发酵

所属期刊栏目：12

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2001AA215401

在线出版日期：2007-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：819-823