一株多菌灵降解菌NY97-1的分子鉴定及GFP标记

摘要：

用PCR方法扩增的多菌灵降解菌NY97-1的16S rDNA片段经TA克隆后,进行序列测定和BLAST同源序列比较分析,确定了其分类地位为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus, B.p).经BamHⅠ酶切的启动子探针载体pUC19-gfp与NY97-1基因组DNA的Sau3AⅠ酶切片段酶连,酶连产物转化E.coli DH5a,建立B.p的启动子基因文库.挑选其中的两个强阳性克隆,亚克隆来自短小芽孢杆菌总基因组的启动子活性片段F4、 F5,构建大肠杆菌-短小芽孢杆菌穿梭表达载体pNW33N-F4-gfp、 pNW33N-F5-gfp.通过电转化得到gfp在B.p中的两株标记菌株.在荧光显微镜下,观察到了明亮的绿色荧光,证明活性片段F4、 F5均具有组成型启动子的功能,实现了gfp基因在B.p中组成型表达,且遗传稳定,为今后研究多菌灵降解菌B.p在自然环境中的定殖、分布及动态变化打下了基础. 图3 表2 参20

关键词：多菌灵降解菌、16SrDNA、GFP、启动子基因文库、组成型穿梭表达载体、电转化

所属期刊栏目：12

分类号：X7(废物处理与综合利用)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2003AA241130;山西省自然科学基金200010192;20051076

在线出版日期：2006-09-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：555-558