水稻精细胞差异表达基因RSG6的克隆和抗体制备

摘要：

选用在水稻精细胞和二细胞花粉的差减文库中获得的在精细胞中表达量显著增强且可能代表新基因的EST之一(BF475207)为探针,筛选水稻精细胞cDNA文库,得到一全长为1 176 bp的序列,其开放读码框编码281个氨基酸,与已知蛋白质无明显同源性,属于一新发现的基因,GenBank登录号为AF442490.这是第1次从高等植物精细胞中分离到的全长基因.RT-PCR结果证明该基因在根、叶、二细胞花粉、成熟花粉、授粉子房和精细胞中均有表达,但在精细胞中的表达量要高得多,是精细胞差异表达基因.将此基因命名为RSG6(rice sperm gene 6).将RSG6的编码区克隆到表达载体pQE30上,构建重组质粒.经IPTG诱导后,在E.coli M15(pREP4)中表达出了N端融合了6×His的融合蛋白.用纯化的融合蛋白免疫家兔,制得高效价、高特异性的抗体.

关键词：精细胞、克隆、大肠杆菌中表达、融合蛋白、抗血清

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分类号：Q785:S511(基因工程（遗传工程）)

资助基金：欧盟国际合作项目ERBIC18CT960072;高等学校博士学科点专项科研项目;教育部高校骨干教师资助计划

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：378-382