番茄细菌性斑点病菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

摘要：

以番茄细菌性斑点病病原菌丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv.tomato,Pst)的致病相关基因HrpZ为靶序列,设计了特异性引物Pst3F/Pst3R,能从Pst基因组DNA中特异性扩增出大小为161 bp的目的片段.建立的Pst实时荧光定量PCR检测技术体系的检测灵敏度比普通PCR高1 000倍.利用实时荧光定量PCR检测体系,检测模拟带菌种子中Pst的带菌量,检测下限为4.21 cfu·g-1;检测人工接种叶片组织中Pst的带菌量,检测到1级发病叶片带菌量为4.15×102 cfu·g-1.对田间采集的63个番茄细菌性斑点病明显症状和疑似症状样本,分别进行了实时荧光定量PCR、普通PCR和病原菌分离检测,检测到54个样本中含有Pst,3种方法检测结果一致.结果 表明,建立的Pst实时荧光定量PCR检测体系具有特异性强、灵敏度高的特点,可以快速准确地定量检测番茄种子和发病组织中Pst的含量,为番茄细菌性斑点病的早期预防和流行监测提供了有效的技术手段.

关键词：番茄、丁香假单胞菌番茄致病变种、实时荧光定量PCR、种子检测、组织检测

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分类号：S641.2

资助基金：国家重点研发计划项目2017YFD0200603;中国农业科学院科技创新工程项目;农业部园艺作物生物学与种质创制重点实验室项目:内蒙古自治区科学技术厅项目201702088

在线出版日期：2019-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：182-192