葡萄病毒B外壳蛋白原核表达及抗血清制备

摘要：

根据已报道的葡萄病毒B(Grapevine virusB,GVB)核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR方法从葡萄中扩增获得GVB外壳蛋白基因(cp),大小为594 bp.通过序列测定和分析,选取优势分离物GVB-JFL cp基因克隆到原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达并纯化融合蛋白pET-GVB CP.SDS-PAGE电泳结果显示,融合蛋白获得过量表达,分子量约26 kD.以纯化蛋白为抗原免疫新西兰大耳白兔制备抗血清.采用间接ELISA和dot-ELISA对抗血清特异性进行检测,结果表明,抗血清可与感染GVB的西方烟和葡萄样品发生阳性反应,与健康植株及感染同属另一种病毒葡萄病毒A(Grapevine virusA,GVA)的样品不反应,阳性样品检测效价达1∶4 000,16个田间样品摩擦接种至烟草后有9个样品ELISA检测为阳性,表明制备的抗血清可用于GVB的特异性检测.

关键词：葡萄病毒B、外壳蛋白、原核表达、抗血清

所属期刊栏目：43

分类号：S661.1(果树园艺)

资助基金：国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目CARS-30-bc-3

在线出版日期：2017-01-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2233-2242