蔬菜中黄瓜花叶病毒的RT-LAMP快速检测

摘要：

为了建立黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)可视化的反转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测体系,根据CMV的外壳蛋白(coat protein,CP)基因核苷酸序列设计4条引物,优化了RT-LAMP反应体系中的dNTPs和Mg2+浓度、反应温度和反应时间,同时对体系进行了特异性和灵敏性的测定.最终确定RT-LAMP的最优反应体系为dNTPs 1.2 mmol· L-1,Mg2+6 mmol·L-1,在61℃的条件下反应40 min.该RT-LAMP体系比RT-PCR反应体系的灵敏度高100倍,并且反应产物可以通过将反应管快速离心后观察底部沉淀或通过加入SYBRGreen Ⅰ后的显色反应进行结果判定.该RT-LAMP检测体系可以对多种蔬菜的CMV进行高效快速的检测,操作简便,花费较小,十分适合生产上检测CMV使用.

关键词：黄瓜花叶病毒、蔬菜、外壳蛋白基因、反转录环介导等温扩增技术、检测

所属期刊栏目：43

分类号：S63(蔬菜园艺)

资助基金：重庆市社会事业与民生保障科技创新专项cstc2015shms-ztzx80011;国家自然科学基金项目30900937;中央高校基本科研业务费专项资金项目XDJK2016A009,2362015xk04;中国烟草总公司四川省公司科技项目201202007;中国烟草总公司湖南省公司科技项目14-16ZDAa02

在线出版日期：2016-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1203-1210